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维生素C在体内参与胶原物质合成，是脯氨酸羟化酶和赖氨酸羟化酶的辅因子，是催化多巴胺转变成去甲肾上腺素的铜酶多巴β羟化酶所必需，当维生素C缺乏时，合成的胶原得不到充分的羟化，不能很好的形成纤维。

维生素C最明显的化学活性是作为还原剂，它可以将Fe³⁺还原成Fe²⁺，促使铁在肠道吸收，促进铁的贮存和利用。

抗坏血酸作为自由基清除剂，可以很快地与O-2、H2O2反应，更快地与OH-反应生成抗坏血酸自由基，它也可以清除O-2，因此，抗坏血酸可以保护机体免受内源性氧自由基的损伤。

维生素C能与-生育酚自由基还原成维生素E，间接地起着链阻断剂作用。

维生素C是血浆中最有效的抗氧化剂，是细胞外液抗氧化防御系统的第一道防线，Vc对血浆中正在进行着的脂质过氧化作用也有阻断作用。

• 快速简便：全程约50分钟，可测100例左右样本。
  
• 取样量微：本法取样本量约为150μL。
  
• 稳定性好：试剂盒2～8℃存放6个月有效。
  
• 再现性好：变异系数CV=1.7%。
  
• 回收试验：X =103.3%。
  
• 受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。
  
• 测试面广：可测动物血清（浆）、组织等，效果均佳。

• 分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪（比色测定波长为536nm）
  
• 恒温水浴箱或气浴箱（孵育温度为37℃）
  
• 台式离心机
  
• 漩涡混匀器
  
• 微量移液器

• 试剂一应用液：
  用时按照试剂一贮备液:双蒸水=1:14稀释，混匀制备。
  
• 试剂二应用液
  用时1支粉剂加0.36mL的冰醋酸再加水至40mL，溶解，4℃保存。
  
• 试剂三应用液
  因较难溶解，用前2～4小时加95%酒精或无水乙醇60mL充分溶解制备，4℃保存。
  
• 试剂四应用液
  用时取0.15mL试剂四贮备液加水至25mL制备，现用现配。
  
• 600g/mL VC标准品应用液
  将1支标准品粉剂溶于10mL试剂一应用液中，制备。
  
• 6g/mL VC标准品应用液
  取600g/mL Vc标准品应用液再用试剂一应用液100倍稀释备用，现用现配。
  注：维生素C标准品易氧化，因此，最好在样本上清液制备好后再配标准，并在10分钟内进行检测。

• 取样本0.15mL加试剂一应用液0.45mL，旋涡混匀，放置15分钟后离心，3500～4000转/分，离心10分钟，上层清亮液体为上清液。
  注：液体样本可直接取0.15mL加试剂一应用液处理制备上清液；组织样本必须先制作匀浆后取0.15mL匀浆液加试剂一应用液处理制备上清液。
  
• 上清液中VC的测定：
  

  成分	空白管	标准管	测定管
  试剂一应用液(mL)	0.4
  6g/mL VC标准品应用液(mL)		0.4
  上清液(mL)			0.4
  试剂二应用液(mL)	0.5	0.5	0.5
  试剂三应用液(mL)	1	1	1
  试剂四应用液(mL)	0.25	0.25	0.25

  
  
• 充分混匀，37℃水浴30分钟。
  
• 各管中加入100μL试剂五，充分混匀，静置10分钟。
  
• 波长536nm，光径1cm（或0.5cm），双蒸水调零，处测各管吸光度值。

• 计算公式
  

  VC含量 (μg/mL)	＝	A测定－A空白	×C标准×N
  		A标准－A空白

  C_标准：标准品浓度6μg/mL；
  N：样本前处理稀释倍数4。
  
• 举例说明
  例1．取血清0.15mL，按步骤操作，测得空白管OD值为0.031，标准管OD值为0.184，测定管OD值为0.144，则计算结果如下：
  

  VC含量 (μg/mL)	＝	0.144－0.031	×6×4＝17.73μg/mL
  		0.184－0.031

• 计算公式
  

  组织VC含量 (μg/mgprot)	＝	A测定－A空白	×C标准×N÷Cpr
  		A标准－A空白

  C_标准：标准品浓度6μg/mL；
  N：样本前处理稀释倍数4；
  Cpr：组织匀浆蛋白浓度，单位是mgprot/mL(prot指蛋白，mgprot即mg蛋白)。
  
• 计算举例
  例1．取10%大鼠肝匀浆0.15mL，按步骤操作后，测得空白管OD值为0.032，标准管OD值为0.184，测定管OD值为0.146，同时测得10%大鼠匀浆蛋白浓度为8.5mgprot/mL，则计算结果如下：
  

  大鼠肝VC含量 (μg/mgprot)	＝	0.146－0.032	×6×4÷8.5＝2.12μg/mgprot
  		0.184－0.032

  
  例2．取20%轮虫匀浆0.15mL，按步骤操作后，测得空白管OD值为0.031，标准管OD值为0.186，测定管OD值为0.177，同时测得20%轮虫匀浆蛋白浓度为0.854mgprot/mL，则计算结果为：
  

  轮虫VC含量 (μg/mgprot)	＝	0.177－0.031	×6×4÷0.854＝26.48μg/mgprot
  		0.186－0.031